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重组腺病毒载体系统
通过与美国Vector Biolab公司及北京大学人类疾病基因研究中心合作，北京诺赛基因组研究中心有限公司利用优越的实验条件和训练有素的科研人员，成功建立了一个集克隆、包装、扩增、纯化为一体的重组腺病毒构建技术平台。从2005年7月成立腺病毒小组开展实验至2006年4月，为课题组内部成功包装200多个腺病毒，为Vector Biolab公司成功包装近300个腺病毒，并且进入美国市场。
本系统是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA为骨架的复制缺陷型重组腺病毒系统，通过对比其他系统（包括Adeasy、Adeno-X、AdMax等系统），对穿梭载体，病毒骨架载体和包装细胞系都做了改进，并且在克隆、包装、扩增、纯化、滴度测定等各步条件也做了改进和优化，经过大量的实验和重复验证工作后，达到了克隆阳性率更高、质量更可靠、包装稳定、出毒迅速、滴度高等效果。使得本系统比上述其他系统有了更强大的优势，可提供高品质、高产量的重组腺病毒。在此基础上，还拓展了更广泛的应用，可以提供各种带报告基因（如GFP、RFP、Luciferase、LacZ等），带不同标签（如HA、myc、His、Flag等）的腺病毒构建和包装服务及RNAi重组腺病毒的构建和包装服务。所包装的腺病毒已成功应用于信号转导，基因转位，Co-IP，动物实验，干细胞研究，原代细胞研究，神经细胞研究等科研实验。我们可以完成较高难度的克隆构建，包括具有细胞毒性作用基因的腺病毒构建，在短时间内完成从原始质粒到病毒DNA的构建工作。
我们的服务
Ø 表达目的基因的重组腺病毒载体构建服务
Ø 超大量及超高滴度的重组腺病毒扩增和纯化服务
Ø 重组腺病毒载体的鉴定
Ø shRNA基因沉默效应验证
Ø 表达shRNA的重组腺病毒载体的构建服务
Ø 构建各种带不同标签和不同报告基因的腺病毒载体
Ø 可调控表达的重组腺病毒载体
Ø 目的基因的克隆，或者定购
我们的承诺
Ø 选择我们的服务，更加方便、快捷。从载体构建、包装、出毒、扩增、纯化到滴度测定共需要45-65个工作日；
Ø 选择我们的服务，可以包装任何有细胞毒性作用的基因；保证100%的包装成功率；
Ø 选择我们的服务，提供高品质，高产量的重组腺病毒；
Ø 选择我们的服务，可提供完备的质检报告，包括提供重组穿梭载体的酶切及测序报告、重组腺病毒载体的酶切及测序报告。
本系统构建、包装、扩增及纯化流程图
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我们的系统优势：
A：载体构建周期短，重组腺病毒载体克隆阳性率率高，(下图是XhoI酶切鉴定结果，阳性率>95%)
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B：完整的穿梭载体系统，常用穿梭载体列表如下
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载体名称
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简要说明
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pShuttle-Basic
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无启动子,用于插入您感兴趣的启动子，和完整的表达框
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pShuttle-CMV
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CMV启动子，用于常规的基因表达
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pShuttle-EGFP-Basic
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用于插入完整的表达框，同时可以表达GFP
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pShuttle-EGFP-CMV
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双表达框，一个表达EGFP，一个用于表达目的基因
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pShuttle-IRES-EGFP
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可同时表达目的基因和GFP
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pShuttle-RFP-Basic
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用于插入完整的表达框，同时可以表达RFP
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pShuttle-RFP-CMV
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可同时表达目的基因和RFP
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pShuttle-U6
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用于表达shRNA
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pShuttle-EGFP-U6
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用于表达shRNA,同时表达GFP
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pShuttle-CMV-HA(N)
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CMV启动子， HA在目的基因N端
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pShuttle-CMV-HA(C)
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CMV启动子， HA在目的基因C端
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pShuttle-EGFP-HA(N)
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CMV启动子， HA在目的基因N端，同时表达GFP
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pShuttle-EGFP-HA(C)
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CMV启动子， HA在目的基因C端，同时表达GFP
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pShuttle-CMV-Flag(N)
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CMV启动子，Flag在目的基因的N端
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pShuttle-CMV-Flag(C)
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CMV启动子，Flag在目的基因的C端
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pShuttle-CMV-Myc(N)
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CMV启动子，Myc在目的基因的N端
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pShuttle-CMV-Myc(C)
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CMV启动子，Myc在目的基因的C端
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pShuttle-CMV-His(N)
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CMV启动子，His在目的基因的N端
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pShuttle-CMV-His(C)
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CMV启动子，His在目的基因的C端
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C：可包装有细胞毒性的基因（下图实验可以说明简要原理）
明场 repreesed GFP expressed RFP
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在改造过的HEK293（reformed）细胞中，转染相同量的受调控的GFP腺病毒，及不受调控表达的RFP腺病毒，同一视野下的实验结果，在常用穿梭载体列表中所有标红的穿梭载体与我们的病毒骨架载体联用，都实现了在改造过的包装细胞系HEK293(reformed)中的调控表达，可实现毒性基因的包装，不影响该基因在正常细胞包括正常HEK293细胞中的表达。
D：包装成功率达到100%，目前所构建的500多个腺病毒载体全部包装成功。
（主要基于对包装细胞系的改造及基因在包装细胞系的受控表达。其他腺病毒包装系统远远达不到这样的包装成功率。）
E：病毒滴度高，纯化后可以达到3×10^11-5×10^11 PFU/ml,体积在2ml左右。
（高滴度的实现也是基于对包装细胞系的改造，及基因在包装细胞系的受控表达）
F：可购买已经构建好的腺病毒，节约了您的时间与经费（部分已构建好的腺病毒列表如下）
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货号
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基因名称
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说明
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AB0069
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IL1A
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表达人 IL1A基因
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AB0070
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IL1B
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表达人 IL1B 基因
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AB0071
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IL4
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表达人 IL4基因
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AB0072
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IL6
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表达人 IL6基因
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AB0073
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IL7
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表达人 IL7基因
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AB0074
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IL8
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表达人 IL8基因
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AB0075
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IL10
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表达人 IL10基因
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AB0076
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IL15
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表达人 IL15基因
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AB0080
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p53(wt)
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表达人 p53(wt)基因，肿瘤抑制基因
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AB0056
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Bax
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表达Bax基因，细胞凋亡的阳性对照
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在此仅列出部分基因的腺病毒载体，如果需要携带其它基因的腺病毒载体，请致电询问。
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G: 提供系统性功能基因研究用腺病毒载体，如基因转位研究，信号转导通路研究等
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货号
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基因名称
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说明
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AB0001
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AP1-Luc
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AP1启动子调控luciferase表达，AP1通路研究
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AB0002
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NFκB-Luc
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NFκB启动子调控luciferase表达，NFκB通路研究
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AB0003
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CRE-Luc
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CRE启动子，调控luciferase表达，CRE通路研究
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AB0004
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SRE-Luc
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SRE启动子调控luciferase表达， SRE通路研究
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AB0005
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SRF-Luc
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SRF启动子调控luciferase表达， SRF通路研究
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AB0006
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P53-Luc
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P53启动子调控luciferase表达， P53通路研究
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AB0010
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NFAT-Luc
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NFAT启动子调控luciferase表达， NFAT通路研究
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AB0011
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TARE-Luc
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TARE启动子调控luciferase表达， TARE通路研究
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AB0023
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RelA-GFP
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RelA与GFP融合，用于基因转位研究
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AB0031
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PKCβ-GFP
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PKCβ与GFP融合，用于基因转位研究
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AB0032
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PKCθ-GFP
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PKCθ与GFP融合，用于基因转位研究
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AB0034
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AP1-GFP
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AP1启动子，调控GFP表达，用于AP1通路研究
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AB0035
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NFκB-GFP
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NFκB启动子调控GFP表达，用于NFκB通路研究
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AB0036
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NFAT-GFP
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NFAT启动子，调控GFP表达，用于NFAT通路研究
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如想构建您感兴趣的信号转导通路或者转位基因的腺病毒载体，可与我们联系。
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常见问题解答（FAQs）
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