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单克隆抗体制备
第一阶段:免疫小鼠
Ø 设计实验方案
Ø 实验动物:5只6-8周龄BALB/C小鼠
Ø 对于已纯化蛋白抗原,客户需提供约3-5mg的量、纯度大于90%,SDS-PAGE检测;对于制备多肽抗原的单克隆抗体,客户需提供已偶联KLH的多肽至少3 mg和检测用未偶联载体的多肽2mg,保证抗原对人体无害,若达不到要求的抗原顾客仍坚持启动项目,风险由顾客承担
Ø 每只BALB/C小鼠至少免疫数次,每次免疫后均用ELISA测定抗体效价
Ø 验收方式: ELISA方法检验
Ø 验收标准:免疫后的小鼠血清与客户提供的抗原样品有特异性结合,抗血清效价在1:10,000 以上
Ø 客户认可后,杂交瘤细胞株进入第二阶段制备,否则终止合作
第二阶段:分泌抗体的杂交瘤细胞株的建立
Ø 免疫细胞与骨髓瘤细胞融合,通过选择和筛选以及克隆化,最终提供2-3个克隆的杂交瘤,以及相应的杂交瘤克隆培养物上清液或少量腹水,并附杂交瘤克隆建株过程的总结报告(包括融合、克隆过程,抗体效价以及抗体免疫球蛋白克隆的亚型)
Ø 验收方式:ELISA方法检验
Ø 验收标准:提供的杂交瘤培养物的腹水(或上清液)与客户提供的抗原样品有特异性结合,同时抗体特异性只针对客户提供的抗原样品做出保证
Ø 服务承诺:2-3株杂交瘤细胞株和及粗制腹水2ml/株,并给出相应的鉴定报告(包括单抗的亚型)
Ø 完成时间:4~6个月
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