蛋白表达与纯化

       随着蛋白药物市场的快速发展和蛋白质组学研究的深入，高纯度活性蛋白的需求越来越大。诺赛基因组建了一支由多名具深厚生物技术基础与制药企业工作经验的留学归国人员和国内专家为核心的团队。在公司现有的基因组学平台与蛋白质组学平台等专有技术平台与系统的基础上，采用与国外先进制药企业同步的技术体系，建立了高效率、高通量的系列技术服务，可为国内外客户提供从基因到蛋白纯化的整套技术服务，如文库构建、基因克隆、原核/真核蛋白表达、蛋白纯化与鉴定和抗体制备，客户亦可根据实验需要选择合适的技术服务。

特色

Ø    稳定而多样的表达系统：诺赛基因已建立整套的基因克隆与表达体系，无论是单个基因的克隆、表达与纯化，还是多个基因高通量的基因克隆、表达和纯化，诺赛基因均能选用适合您试验（科研项目）需要的表达系统（包括大肠杆菌、毕赤酵母、昆虫杆状病毒以及哺乳动物细胞等）和合适的表达载体为您提供优质的服务。

Ø    多种纯化方式：诺赛基因可为客户提供多种蛋白纯化服务，纯化方式包括亲和层析纯化、凝胶过滤、离子交换、疏水层析等，客户可根据需要选择合适的纯化方式。

Ø    专业的团队和良好的信息管理体系：专业的基因克隆、蛋白表达与纯化技术人员与团队，具有丰富的表达和纯化经验，可为客户解决各种瓶颈问题, 良好信息管理体系使我们能够为客户提供成熟、高效的基因克隆服务。

实验流程

Ø    大肠杆菌和酵母蛋白表达系统：

• 诺赛基因合成基因（另外收费）或者客户提供模板(cDNA、基因组DNA、质粒等)
• 构建表达载体
• 筛选阳性克隆
• 表达优化和可溶性分析
• SDS-PAGE检测表达
• Western blot检测表达（可选）

Ø    昆虫杆状病毒蛋白表达系统

• 诺赛基因合成基因（另外收费）或者客户提供模板(cDNA、基因组DNA、质粒等)
• 构建表达载体
• 重组和筛选阳性克隆
• 提取重组Bacmid
• 感染Sf9细胞制备重组病毒
• 病毒滴度测定
• 优化表达条件和细胞株（蛋白表达优化一步需要）
• Western blot检测蛋白表达

Ø    哺乳动物细胞瞬时表达小试

• 诺赛基因合成基因（另外收费）或者客户提供模板(cDNA、基因组DNA、质粒等)
• 构建表达载体
• 瞬时转染HEK293等哺乳动物细胞
• Western blot检测（特异性一抗需客户提供）
• 表达优化
• 如果目的蛋白有表达，从50ml细胞培养液中纯化目的蛋白

Ø    哺乳动物细胞稳定表达细胞株建立

• 诺赛基因合成基因（另外收费）或者客户提供模板(cDNA、基因组DNA、质粒等)
• 构建表达载体
• 稳定转染细胞
• Western blot检测检测（特异性一抗需客户提供）
• 如果目的蛋白有表达，转染细胞后筛选稳定表达细胞株

提供结果

Ø    构建的表达载体及测序报告

Ø    SDS-PAGE结果

Ø    筛选的表达菌株

Ø    Western blot结果

Ø    简单实验流程及结果

Ø    2ml 1.0×10^8pfu/ml的病毒（利用昆虫杆状病毒蛋白表达系统表达时）稳定表达细胞株（哺乳动物细胞）