cDNA文库构建/EST测序分析

      诺赛为客户提供高通量、快速优质的EST测序服务，同时还建立了成熟的cDNA文库构建平台，可进行多种cDNA文库构建，为EST研究提供全方位服务。   

特点：

Ø    我们拥有成熟的实验方法和丰富的文库建库经验，在cDNA合成、酶切、连接及转化等方面拥有成熟的技术和文库构建经验丰富的专业人员，建成的文库全长cDNA比例高，可用于大规模基因测序和目的基因的筛选。

Ø    构建的为质粒文库，可选择的载体有pCMV.SPORT6（真核表达载体）和pSPORT 1原核表达载体

服务流程：

Ø    阶段1：反转录酶催化合成cDNA第一链

Ø    阶段2：cDNA第二链的合成

Ø    阶段3：cDNA的甲基化

Ø    阶段4：接头或衔接子的连接

Ø    阶段5：凝胶过滤法分离cDNA

Ø    阶段6：cDNA与载体臂的连接

客户提供：

Ø    请提供尽量多的新鲜材料：
a.如果实验材料为动物组织材料，样品量需大于5g
b.如果实验材料为植物组织材料，样品量需大于20g
c.如果实验材料为各种培养细胞，请提供5×10^7以上培养好的细胞。

Ø    客户也可以直接提供Total RNA，但要保证没有降解，需要温育后（37℃，1-2小时）通过电泳等方法进行判断，其纯度要求A260/280≥1.8，样品总量大于250μg。

提交结果：

Ø    实验完成后，我们将提供完整的实验报告，构建好的cDNA文库库容量为106。

Ø    在连接克隆cDNA片段时，进行了cDNA片段的长度筛选，基本上去除了400bp以下的cDNA小片段，保证了较长cDNA片段的克隆效率，克隆载体一般为pcDNA3.1，也可以为客户提供的其它载体。

Ø    我们可以对构建好的文库提供后续如克隆保菌、PCR扩增、大量测序等服务，需另行收费。

提供服务：

Ø    cDNA文库构建，大规模测序，数据信息处理及分析