Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV-1）载体包装服务介绍

        Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV-1）载体应用广泛，由于其独特的优势目前已经发展成最有前景的病毒载体之一。根据HSV-1的嗜神经性且对神经细胞无任何伤害，能长期潜伏于神经元细胞中，通过LAT区潜伏表达，HSV-1载体已经成为神经系统中最有效的基因表达载体，在国外已被广泛应用于神经系统疾病（帕金森、阿尔茨海默、慢性疼痛等）的基础研究和药物开发上；根据HSV-1载体对DC细胞的高转染率并能同时装载多个抗原基因，HSV-1载体作为基因疫苗前景非常广阔；由于HSV-1具有广泛的溶瘤谱，HSV-1载体是基因治疗药物的最佳候选之一，能携带多个治疗基因；此外由于HSV-1载体的广泛侵染性和高转导率，其在RNA干扰研究中正发挥越来越重要的作用。

Ø    分析所使用的HSV-1载体质粒（神经系统应用中HSV-1载体质粒使用pNX01/CMV质粒，免疫系统应用中HSV-1载体质粒pB205/CMV质粒，RNA干扰应用中使用pNX01/U6质粒）的结构和多克隆位点，选定目的基因克隆所需的酶切位点；

Ø    使目的基因两端的位点与克隆位点适配；

Ø    将目的基因插入于HSV-1载体质粒的多克隆位点中；

Ø     酶切鉴定，必要时测序。

Ø    对构建和鉴定正确的质粒进行大提制备，检测质粒的OD260/280比值和浓度。

Ø    将载体质粒同HSV-1改构后的载体NX01基因组DNA共转染补偿细胞系，获得阳性NX01载体。

Ø    PCR鉴定阳性病毒载体，确认目的基因正确包装到NX01载体中

Ø    扩大培养病毒、收获、凝胶柱纯化、获得高滴度，非复制并带有目的基因的NX01载体

我们的服务

Ø    诺赛依托HSV-1载体技术平台，能为客户提供HSV-1载体的基因包装、纯化、生产以及质量检定等一系列服务，为基础科学研究、药物临床前研究和临床研究提供高滴度和高纯度的HSV-1载体。

Ø    诺赛为实验室研究者提供可用于细胞和动物实验的研究级HSV-1载体的目的基因包装构建和制备服务，客户经8-10周就可获得纯化后浓度为1×108pfu/ml的含目的基因HSV-1载体。诺赛同时为药物开发公司或机构提供临床级HSV-1载体的生产和报检服务，在GMP条件下为客户生产可以用于临床前研究（包括安全性和有效性试验等）、药品报检和临床研究的HSV-1载体制品和技术资料。

Ø    诺赛提供的HSV-1载体包装服务的最小包装规格为200µl、1×10^8pfu/ml，一般能满足实验室研究水平的体外培养实验和动物预实验之用，根据客户的需求，公司也可以提供大包装、更高滴度的产品。HSV-1载体使用方法简单，易操作，不需要辅助病毒和复杂的实验准备工作，客户收到产品后即可立即开展实验。以HSV-1载体在神经系统的应用为例，体外培养时更换培养基后直接加入HSV-1载体至MOI为1.0，对神经元细胞的转染率一般在80％以上，8小时后即开始表达包装入的目的基因。立体定向注射HSV-1载体至大鼠神经系统，注射5µl，12小时后即有目的基因表达，可持续观察6周以上。 

已构建产品

Ø    携带标记基因的HSV-1载体:NX01-GFP/RFP(用于神经系统的双荧光标记载体)，NX01-GFP（用于神经系统），NX01-LacZ（用于神经系统）

Ø    携带针对GFP基因的双干扰片断HSV-1载体:NX01-U6/H1-GFPi

Ø    携带功能基因的HSV-1载体：rNT3，rBDNF，rCNTF，hNGF，survivin,hNT4,hVEFGA.