DHPLC法

特点：

Ø    拥有高端变性高压液相色谱仪(WAVE 3500HT)等仪器设备，配备有国内领先和国际一流水平的研究队伍。

Ø    采用DNA样品池法(将若干份PCR样品混合在一起)，使得纯合突变也能以杂合子形式得以捡出，极大提高了寻找未知SNPs的效率。

Ø    具有高通量检测、自动化程度高、灵敏度和特异性较高、检测DNA片段和长度变动范围广、相对价廉等优点

Ø    检测所需的样品量很少，PCR产物高于80ng就能满足实验要求，且无需纯化，实验重复性好

Ø    上机时间短，只需5~6min就可得出数据

Ø    根据峰图可判断是否有突变，但不能确定SNP的位置和类型，需用标准样品或结合测序验证

原理：

DHPLC基因突变筛查，就是利用离子对反向液相色谱技术，通过独特的DNA分离基质，对特定的PCR反应产物进行分离。含有突变位点的PCR扩增产物经变性、逐步降温退火后，将形成同源和异源双链（一条为突变链，另一条为正常链）两种DNA分子.在部分变性条件下，发生错配的异源双链DNA更易于解链为单链DNA，与DNAsep柱结合力降低，比同源双链DNA分子更易于被乙腈洗脱下来，从而与同源双链DNA分离.一般来说，含变异成分的PCR产物将在DHPLC图谱上比PCR非变异产物多1-2个峰型，因而两者可以被鉴别.

实验流程：

Ø    DNA提取，设计引物并合成

Ø    PCR

Ø    上机检测，数据采集以及分析

客户提供：

Ø    准确的基因名称和序列以及SNP位点信息

Ø    A、组织或血液样品B、基因组DNA 样品，需-20度保存和运输

Ø    纯度要求：OD260/280在1.6~1.8之间；OD260/230在1.8~2.2之间

Ø    浓度要求( C) ：基因组DNA浓度大于100ng/µl    

Ø    DNA用量需求（ UL）：PCR反应个数（N）* （M）/ （C）

Ø    单个PCR反应量(M)：50ng

Ø    PCR产物大小在150~800bp之间，最好在300bp左右，里面不含矿物油、甲酰胺、高压灭菌水、蛋白酶 K、牛血清白蛋白

Ø    为了提高 PCR 扩增的保真性，最好选用 Pfu DNA 聚合酶

提供结果：

Ø    提供每个PCR产物的琼脂糖凝胶电泳图片

Ø    提供电子版结果及实验流程

Ø    提供数据分析服务

Ø    实验数据及实验剩余的样品和引物为客户所有

收费构成（具体价格请咨询）

Ø    DNA提取费用

Ø    引物设计及合成费用

Ø    PCR扩增费用

Ø    上机费用

Ø    数据分析费用