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        • 产品名称: GeneScan常见问题及解答
        • 时间: 2014-12-16
        • 浏览次数: 167

         

        GeneScan常见问题及解答

         

        Q1. GeneScan实验是什么?可以做那些方面的工作?

        答:GeneScan是一种用途广泛的DNA片段分析技术,是将荧光标记的DNA片段如PCR产物在测序仪上对大小、数量进行分析检测的过程,被广泛运用于STR分析、SSCP分析、AFLP作图、MLPA分析等,可以为人类全基因组或部分区域扫描、个体识别、DNA限制片段检测等提供详尽的分析数据。

         

        Q2.GeneScan实验的PCR和普通实验的PCR有何区别?

        答:两者最大的区别就在引物上,前者需要在合成引物时标记上荧光这样PCR产物才能在测序仪上完成检测,实验条件和普通PCR条件一致。如果考虑实验成本可以先合成普通引物摸索实验条件,成熟后再合成荧光引物开始正式实验。

         

        Q3.常见的荧光标记都有那几种?可否将不同荧光标记的产物混合上机?

        答:常见的有FAMVICHEXTETJOERox TAMRANED PET等。产物可以混合上样,相同荧光标记的片段相差25bp以上。不同荧光标记的片段相差15bp以上。混合样品最好不要超过3种不同片段产物(商业化多重扩增试剂盒除外)。

         

        Q4.你们提供的内标有几种?有何区别?选用不同内标价位是否一致?

        答:我们现在提供三种内标分别是:rox400liz500liz1200。其中roxliz分别代表荧光标记的名称rox为红色,liz为橙色。后面的数字代表可以检测到最大的片段(单位:bp)。选用liz1200的内标要比选用其他两种内标的价钱高一些。

         

        Q5.GennScan实验结果需要用那些软件分析?你们是否可以提供软件?

        答:GennScan实验产生后缀为.fsa的原始结果,这种后缀的结果需要用专门的软件来进行分析。现在市场上可以分析这种结果的软件只有三种分别是:GenemapperGenotyperGeneMarker因为这三种都是商业化的软件需要购买所以我们暂时不能提供软件。

         

        Q6.送样之前是否需要电泳检测?

        答:如果您是新引物的预实验需要进行琼脂糖电泳检测,待条件稳定后正式实验可以不检测样品直接送样。毛细管电泳精度是普通琼脂糖电泳的100倍所以在琼脂糖电泳下未见的条带有可能在毛细管电泳下可见。

         

        Q7.PCR有杂带需要处理吗?

        答:要视具体情况而定。如你的目的片段是200bp而在100bp附近出现杂带可以不做处理,在分析结果的时候可以只分析目的片段范围的结果。但是如果杂带距离目的片段很近小于30bp的范围就需要处理样品了。

         

        Q8.PCR产物需要纯化吗?

        答:通常情况下样品可不经纯化直接上机,但以下情况需做纯化处理:

        I.大片段选用LIZ1200内标的样品。因为LIZ1200片段多电泳时间长,如果样品不纯会将内标带乱造成样品无法正常分析。

        II.多重片段样品混合。此类型样品因为多种片段混合造成引物带浓度增强,电泳时影响内标准确性。

        IIIPCR时选用可直接电泳PCR Master Mix试剂。此类型PCR产物含后色素试剂,对我们毛细管有比较大的伤害,此外可以使电泳的迁移率发生变化影响结果的准确性。

         

        Q9.如何判定结果的好坏?

        答:每个样品在上机时都会加入内标,内标作用相当与电泳时的marker,所以我们判定结果是否正常主要看电泳后内标的情况。如果内标正常我们认为实验是成功的需要正常收费,内标异常说明电泳时出现问题我们可以再次安排免费上机。

         

        Q10.你们提供什么样的结果?

        答:我们提供三种形式的结果:测序仪产生的后缀为.fsa文件的原始结果、软件分析后的表格形式的结果、软件拷图结果(我们给没有软件的客户提供部分的拷图结果)。

         

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