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        全长基因合成常见问题及解答

         

        Q1. 为什么要进行全长基因合成?
        答:最常见的获得目的基因的方法是通过PCR扩增。但很多的时候,PCR扩增只能得到微量或根本得不到目的基因。主要原因是含有目的基因的模板较难获得或成本较高,其次,如果目的基因在模板或文库中的含量较低,也很难特异地扩增出来,还有一些目的基因由于GC含量很高或含有复杂结构很难被扩增或者连接不到载体上,再次,PCR扩增得到的目的基因可能会含有许多点突变或单核苷酸多态性,对后期的实验带来极大麻烦。因此,通过全长基因合成,可以在第一时间获得100%正确的目的基因,节省实验时间和成本。

         

        Q2.什么样的基因是复杂基因?
        答:①低GC含量序列:一般是指GC含量低于20%的基因,或100bp以内GC含量少于10%的序列;若不包含发卡结构、反义互补、重复等其它复杂结构,一般将其分割成200bp/段来合成,然后通过合适的内切限制酶酶切后连接(常用BsaI和BpiI,所以序列本身最好不含有这两种酶切识别序列),这样更易得到正确的克隆,但是发货期将比正常序列更长一些,而且价格也比常规基因稍贵。
        ②高GC含量:一般是指GC含量高于70%的序列或100bp以内GC含量高于80%的序列;高GC序列难于测序,所以GC>75%的序列合成业务,请特别询价,对于此类序列也需要将其分割成300bp的片段来合成。
        ③反义互补重复序列:不易于测序,一般不承接该类序列合成业务。
        复杂基因与常规基因相比,合成费用较高,合成时间相对延长。对于复杂基因,可通过密码子优化,尽量减少基因序列中的重复序列,高GC%区和二级结构区。

         

        Q3. 如何运输以及保存质粒及其菌株?
        答:我们为您提供含有完全正确的基因序列的质粒(不少于5ug)两管和菌液(1mL)一管。质粒可常温运输,溶解后需-20℃保存,并尽量避免反复冻融。菌液需4℃运输,长期保存应置于-80℃。

         

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